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正文摘录:

临床和实验医学杂志2008年3月第7卷第3期·17·缺氧对人胃癌细胞的细胞周期调控及己糖激酶Ⅱ表达的影响研究蔡刁龙。朱光辉。翁杰锋。(1陆丰市甲子镇人民医院外科广东r~-~-516538；2广州N-学院附属广州市第一人民I'N院肝胆外科广东广州510180)【摘要】目的探讨缺氧对人胃癌细胞株SGC一7901的细胞周期调控机制及对乏氧诱导因子一10l(HIF—let)、己糖激酶Ⅱ(HKII)表达的影响。方法人胃癌细胞株SGC一7901分成3组：缺氧12h组、缺氧24h组及对照组。缺氧组分别在缺氧条件下(37℃、5％C02、2.0％02饱和度)培养12h和24h，对照组置于正常氧浓度条件下(37℃、5％c02、21％0，饱和度)培养24h。流式细胞仪检测细胞周期分布，免疫组织化学S2P法检测HIF—let表达，荧光定量PCR法检测HKⅡmRNA表达量。结果缺氧情况下细胞周期分析处于GO／G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，并且可见到较明显的凋亡峰的形成，缺氧12h组、缺氧24h组的GO／G1期比例显著高于对照组(P＜0.05)；HIF—let和HKⅡ在两组缺氧组与对照组比较，其表达量明显增加(P＜0.05)，缺氧24h组与缺氧12h组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。结论缺氧导致细胞阻滞在GO／G1期，HIF—let可刺激人胃癌细胞HKⅡ表达的增加，以HIF一1理为药物靶点可望成为治疗胃癌的重要新方法。【关键词】缺氧乏氧诱导因子一1d己糖激酶胃癌EffectsofhypoxiaoncellcycleandhexokinaseHexpressioninhumangast~ccarcinomacells.CAIDiao—long。，ZHUGuang—hui。，WENGJie一疗，曙2.1DepⅡrtmentofSurgeryofJiazihospital，LufengGuangdong516538，China；2DepartmentofGeneralSurgeryofGuangzhouFimtMunicipalPeople'sHospital.GuangzhouGuangdong510180，China-【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheimpactofcellcyclesarrest，expressionofhypoxia—induciblefactor—lct(HIF一1d)andhe。。ki。【laseⅡ(HK11)_n即striccarcinomaceⅡunderthehypoxicenvironment.MethodsHumangastriccarcinomacelllineSGC一7901weredividedin协3灯oups：groupofhypoxiafor12handfor24h，andthecontrolgroup.Thetw0hypoxicgroupswereexposedtohypoxiccondition(37qC、5％CO，、2％O，)fbr12hand24hrespectively.Thecontrolgroupwasexposedtonormaloxygencondition(37℃、5％c02、21％02)for24h·CellcvclewasexaJninedbyflowcytometryanalysi。；HIF—ldwasmeasuredbyimmunohistochemistryandHKⅡwasdetectedbyreal—timequantita—tivePCR.ResuItsCellsaccumulatedinthegap0andgap1(G0／G1)phases(groupsofhypoxiafor24hand12hvs.thecontrolgroup(P＜0.05)；whilereducedinthegap2andmitosis(G2／M)phasesofthecellcycle，andtheapoptosispeaksignificantlyoccurredafterhypoxiatreat。ment.HIF一10【andHKHexpressionwassignificantlyhigherinhypoxiegroupsthanincontrolgroup(groupsofhypoxiafor24h、…一12hvs·the(伽trI】l印，up(P＜0.05)；groupofhypoxiafor24hvs.forl2h(P＜0.05).ConclusionTheseresultssuggestthat，amark。‘l‘m‘’’alTe。‘ofceltcvcleandahighlevelofHK1／expressionareinducedunderthehypoxicenvironment，demonstratingthepotentialmleofHI!一J‘，largetedtherapyingastriccarcinoma.【Keywords】Hypoxia；Hypoxia—induciblefactor一1d；HexokinaselI；Gastriccarcinoma实体肿瘤在发展过程中，因瘤体增大血液供应不足而产生缺氧，缺氧又能通过一个关键的转录因子一乏氧诱导因子(hypoxia—induciblefactor，HIF)使肿瘤的血管增生、转移、耐药等恶性行为更为明显。。]。恶性肿瘤具有高度的糖分解代谢表型，是以糖酵解限速酶己糖激酶Ⅱ(HKⅡ)的高活性为基础的。乏氧诱导因子一1et(Hypoxia—induciblefactor—ld，HIF一101)是细胞对缺氧环境的主要调节因子，能在缺氧状态下诱导一系列低氧反应基因的表达，提高机体对缺血缺氧的耐受。肿瘤细胞因增殖活跃，其能量需求远高于正常组织，在相对缺氧环境中HK1／的表达增加是否受到HIF—let的调控，尚不清楚。因此，作者拟检测缺氧对胃癌细胞株SGC一7901的细胞周期的影响及缺氧状态下HIF一1d、HKII表达的变化，探讨在缺氧环境中HKII的表达增加是否受到HIF—let的调控。1材料与方法1.1材料人胃癌细胞株SGC一7901购自上海细胞研究所；兔抗人HIF一1d多克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，碘化吡啶(PI)购自美国Sigma公司，荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测试剂盒TaqManUniversalPCRMasterMix购自美国ABI公司。1.2细胞培养及分组人胃癌细jE杯s(：【：一7901以含10％胎牛血清的RPMll640于在37~C，5％f：r)、堵球锦中培养，隔天换液一次，0.25％胰酶／EDTA消化传代文蛐兮乃3组：缺氧12h组、缺氧24h组、对照组(正常氧浓K2-}㈦，薄瓶细胞数为2×10’／ml，每瓶加入2ml培养液，继续tj}。‘?{j.5％C02的细胞培养箱中培养24h，待细胞生长达对数。l：。0川，将实验组细胞置于37~C、5％c0：、2.0％02饱和度的绱一.以·i琅箱中培养12h、24h，对照组在37~(2、5％C02、21％02条件‘{r岸24h。1.3细胞周期分析收集上述处理后的细胞，磷酸盐缓冲液(PBS)洗两次，使用30％的PBS乙醇重悬细胞沉淀，摇匀后向细胞悬液中加入5山的碘化丙啶(PI)，闭光作用5min后上机检测。1.4HIF—let检测收集细胞用PBS冲洗一次，3％过氧化氢(H，O，)阻断内源性过氧化物酶，羊血清封闭10min，加入兔抗人HIF21仅多克隆抗体37~C孵育2h，加入通用型生物素标记的二抗，室温孵育20min，加入辣根过氧化酶(HRP)，二氨基联苯胺(DAB)显色，镜下观察。染色结果采用HPLAS2100彩色图像分析系统进行分析，表达强度用平均吸光度表示。1.5HKⅡ检测收集各组细胞，以Trizol说明书操作提取